大鼠肺微血管内皮细胞的体外分离培养与纯化

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.024

畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (10): 2143-2150.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.024

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大鼠肺微血管内皮细胞的体外分离培养与纯化

梁宏伟¹，冯波^1，2，朱雯宇¹，王建舫¹，张涛¹，穆祥^1*

(1.北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室，北京 102206；2.中国农业大学动物医学院，北京 100193)

收稿日期:2016-06-15 出版日期:2016-10-23 发布日期:2016-10-23
通讯作者: 穆祥（1960-），男，江苏启东人，教授，硕士，主要从事中兽医药及疾病防控研究
作者简介:梁宏伟(1990-)，女，河北承德人，硕士生，主要从事中兽医药及疾病防控方面研究，E-mail: 1581926010@ qq. com
基金资助:
国家自然科学基金（31272144）

Cultivation and Purification of Rat Pulmonary Microvascular Endothelial Cells in vitro

LIANG Hong-wei¹，FENG Bo^1，2，ZHU Wen-yu¹，WANG Jian-fang¹，ZHANG Tao¹，MU Xiang^1*

(1.Beijing Key Laboratory of Traditional Chinese Veterinary Medicine，Beijing Universisty of Agriculture，Beijing 102206，China；2.Veterinary Medicine in China Agricultural University，Beijing 100193，China)

Received:2016-06-15 Online:2016-10-23 Published:2016-10-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在建立一种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞的方法。取5~7日龄SD大鼠分离外周肺组织，组织植块法获得原代大鼠肺微血管内皮细胞，37 ℃、5% CO2 培养箱中传代培养，采用免疫磁珠法对其进行分离纯化，并对分离纯化后的细胞进行免疫荧光及流式细胞鉴定，通过MTT比色分析法准确、安全、可靠地检测纯化后传代肺微血管内皮细胞的增殖情况。结果显示：倒置显微镜下观察单个细胞呈短梭形或多角形，汇合后呈铺路石样，单层贴壁生长，细胞分离纯化后经免疫荧光检测CD31呈阳性，流式细胞仪检测淋巴管内皮细胞表面特有标记VEGFR-3呈阴性（P=0.1，且P<0.5），且复苏后经MTT测得传代细胞的增殖情况良好。成功建立了一种分离高纯度大鼠肺微血管内皮细胞的体外培养方法。

Abstract:

This study aims at establishing a simple method of obtaining the high-purity rat pulmonary microvascular endothelial cells isolated and cultured in vitro.Peripheral lung tissues were separated from 5 to 7 days of SD rat under sterile condition.Rat pulmonary microvascular endothelial cells was acquired by taking the tissue graft block method，digested with trypsin and then maintained at 37 ℃ in a 5% CO₂ humidified atmosphere.The cells were purificated using the method of immune magnetic beads，subsequently identified by the immunofluorescence and flow cytometry，and then determined by MTT colorimetric analysis to detect the original generation of pulmonary endothelial cell growth curve.Rat lung microvascular endothelial cells was successfully obtained by taking the tissue graft block method and individual cells under inverted microscope showed short fusiform or polygon and a typical paying stone appearance with single-layer adherent growth after confluence.The cells were strongly positive for CD31 factor and negative（P=0.1，and P<0.5） for lymphatic endothelial cell specific surface marker VEGFR-3 detected by immunofluorescence staining and flow cytometry respectively.In our study，a method of higher purity of rat lung microvascular endothelial cells culture in vitro was successfully established.

中图分类号:

S852.21

梁宏伟，冯波，朱雯宇，王建舫，张涛，穆祥. 大鼠肺微血管内皮细胞的体外分离培养与纯化[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(10): 2143-2150.

LIANG Hong-wei，FENG Bo，ZHU Wen-yu，WANG Jian-fang，ZHANG Tao，MU Xiang. Cultivation and Purification of Rat Pulmonary Microvascular Endothelial Cells in vitro[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(10): 2143-2150.

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参考文献

［1］ROSEMBLATT M，BONO M R．Functional consequences of immune cell adhesion to endothelial cells［J］.Curr Pharm Des，2004，32(4)：109-120.
［2］SAKAO S，TARASEVICIENE S L，WOOD K，et al.Apoptosis of pulmonary microvascular endothelial cells stimulates vascular smooth muscle cell growth［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2006，291(9)：362-368.
［3］AKULA S M，WANG F Z，VIEIRA J，et al.Human Herpes virus 8 Interaction with Target Cells Involves Heparan Sulfate［J］.Virology，2001，282：245-255.
［4］FEDERICO B，STEFANIA M，GUIDO S，et al.Interactions between endothelial cells and HIV-1［J］.Int J Biochem Cell B，2001，33：371-390.
［5］田丽芳，张涛，张爽，等.口蹄疫 146 S 对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌 IL-6 的影响［J］.中国农学通报，2008，24(4)：19-22.
TIAN L F，ZHANG T，ZHANG S，et al.Effect of foot and mouth disease 146 S on the secretion of IL-6 in cardiac microvascular endothelial cells of neonatal rats［J］.Chinese Agricultural Science Bulletin，2008，24(4)：19-22.(in Chinese)
［6］ITO T，KOBAYASHI Y，MORITA T，et al.Virulent influenza A viruses induce apoptosis in chickens［J］.Virus Res，2002，84(1-2)：27-35.
［7］VIEMANN D，SCHMOLKE M，LUEKEN A，et al.H5NI virus activates signaling pathways in human endothelial cells resulting in a specific unbalanced inflammatory response［J］.J Immunol，2011，186(1)：164-173.
［8］ZENG H，PAPPAS C，BELSER J A，et al.Human pulmonary microvascular endothelial cells support productive replication of highly pathogenic avian influenza viruses：possible involvement in the pathogenesis of human H5N1 virus infection［J］.J Virol，2012，86(2)：667-678.
［9］OCANA-MACCHI M，BEL M，GUZYLACK-PIRIOU L，et al.Hemagglutinin-dependent tropism of H5N1 avian influenza virus for human endothelial cells［J］.J Virol，2009，83(24)：12947-12955.
［10］LEWIS W H，WEBSTER L T.Wandering cells，endothelial cells，and fibroblasts in cultures from human lymph nodes［J］.J Exp Med，1921，34(4)：397-405.
［11］MARUYAMA Y.The human endothelial cells tissus culture［J］.Z Zellforsch Mikrosk Anat，1963，60：69-79.
［12］DAVISON P M，BENSCH K，KARASEK M A.Isolation and growth of endothelial cells from the microvessels of the newborn hunman foreskin in cell culture［J］. J Invest Dermatol，1980，75(4)：316-321.
［13］徐顺贵，吴国明，徐智，等.组织块法培养大鼠肺微血管内皮细胞的综合鉴定［J］.第三军医大学学报，2007，29(1)：39-42.
XU S G，WU G M，XU Z，et al.Comprehensive identification of rat pulmonary microvascular endothelial cells cultured by tissue block method［J］.Journal of Third Military Medical University，2007，29(1)：39-42.(in Chinese)
［14］姜文.大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法研究［J］.中外医学研究，2011，9(10)：3-4.
JIANG W.Primary culture method of rat pulmonary microvascular endothelial cells［J］.Chinese And Foreign Medical Research，2011，9(10)：3-4.(in Chinese)
［15］高润娣，曹婕，卢珊，等.小鼠肺微血管内皮细胞的培养鉴定及其血管形成功能的研究［J］.中国病理生理杂志，2012，28(1)：186-188，192.
GAO R D，CAO J，LU S，et al.Culture and identification of mouse pulmonary microvascular endothelial cells and Study on its function of blood vessel formation［J］.Chinese Journal of Pathophysiology，2012，28(1)：186-188，192.(in Chinese)
［16］孙振朕，蔡在龙，朱科明，等.小鼠肺微血管内皮细胞磁珠分选法分离和原代培养［J］.中国组织工程研究与临床康复，2010，14(50)：9366-9369.
SUN Z Z，CAI Z L，ZHU K M，et al.Mouse pulmonary microvascular endothelial cells were isolated and cultured［J］.Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research，2010，14(50)：9366-9369.(in Chinese)
［17］王明明，杨舒，董虹，等.白头翁汤通过保护微血管内皮细胞的完整性及PMNs迁移杀菌功能的影响［J］.畜牧兽医学报，2016，47(4)：836-843.
WANG M M，YANG S，DONG H，et al.Effect of Baitouweng Decoction by protecting microvascular endothelial cell integrity and PMNs migration sterilization function［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2016，47(4)：836-843.(in Chinese)
［18］LI C，SUTTIE J M.Tissue collection methods for antler research［J］.Eur J Morphol,2003，41(1)：23-30.
［19］郭洋.治疗猪链球性脑膜炎中药方剂筛选及其作用机理的初步研究［D］.长春：吉林大学，2014：27-33.
GUO Y.A preliminary study on the treatment of swine meningitis global chain screening and mechanism of traditional Chinese Medicine［D］.Changchun：Jilin University，2014：27-33.(in Chinese)
［20］MEHTA D，MALIK A B.Signaling mechanisms regulating endothelial permeability［J］.Physiol Rev，2006，86(1)：279-367.
［21］KING J，HAMIL T，CREIGHTON J，et al.Structural and functional characteristics of lung macro-and microvascular endothelial cell phenotypes［J］.Microvasc Res，2004，67(2)：139-151.
［22］KOBAYASHI M，INOUE K，WARABI E，et al.A simplemethod of isolating mouse aortic endothelial cells［J］.J Atheroscler Thromb，2005，12：138-142.
［23］何孟栖，陈利国.血管内皮细胞原代培养方法的改良及应用［J］.陕西医学杂志，2004，33(7)：581-582.
HE M X，CHEN L G.Improvement of primary culture method of vascular endothelial cells and its application［J］.Shanxi Medical Journal，2004，33(7)：581-582.(in Chinese)
［24］贾建桃，张慧英，王黎敏，等.肺微血管内皮细胞原代培养方法的建立［J］.细胞与分子免疫学杂志，2014(7)：763-766.
JIA J T，ZHANG H Y，WANG L M，et al.Establishment of primary culture method of pulmonary microvascular endothelial cells［J］.Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology，2014(7)：763-766.(in Chinese)
［25］KUKK E，LYMBOUSSAKI A，TAIRA S，et al.VEGF-C receptor binding and pattern of expression with VEGFR-3 suggests a role in lymphatic vascular development［J］.Development，1996，122(12)：3829-3837.

[1]	刘杰, 丛玮, 赵敏蝶, 赵茹茜. AA肉鸡和如皋黄鸡海马和下丘脑GR和FKBP5的表达及其与应激敏感性的关系[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4766-4776.
[2]	杨恒, 李利财, 付琳, 胥辉豪, 张德志, 李前勇. 前列腺素D₂对山羊黄体细胞内分泌功能及其凋亡相关基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(4): 1652-1663.
[3]	叶倩文, 陈卓, 李鑫, 孙亚伟, 金肖叶, 李紫仟, 吾买尔江·牙合甫, 钟旗, 马雪连, 姚刚. 一月龄吮乳羔羊肠道菌群组成及其预测物质代谢功能的动态变化研究[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(3): 1095-1108.
[4]	刘志豪, 贾鹏, 赖琦, 董利锋, 吴秋珏, 高彦华, 田忠红, 刁其玉. 泌乳牛不同胎次干奶期瘤胃发酵指标与甲烷产量的特征[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(12): 4296-4305.
[5]	袁婧, 张欣欣, 周迪, 杨帅, 周家彦, 梁爱心, 杨利国. 以减毒沙门菌为载体的SS和CST双表达DNA疫苗经不同途径免疫犊牛的效果评价[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(6): 1914-1924.
[6]	马天瀛, 李怡霖, 董心玥, 佀蓉蓉, 白雪, 王子旭, 陈耀星, 曹静. 食物摄入与下丘脑能量平衡[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(7): 1789-1799.
[7]	张春桃, 马涛, 屠焰, 刁其玉. 生物节律对动物生理营养及物质消化利用调控的研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(4): 872-880.
[8]	李凡, 陈晓阳, 杨国雨, 李福昌. Wnt/β-连环蛋白信号通路在哺乳动物毛囊发育中的调控作用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(11): 2186-2194.
[9]	张石磊, 包佳鹭, 史万玉, 钟秀会. 母鼠孕期和哺乳期连续染毒双酚A对子代雄鼠睾丸发育的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 993-1005.
[10]	孟范勇, 邓益锋, 杨俊花, 崔军, 周振雷, 侯加法. TRPV6基因沉默对蛋鸡十二指肠和空肠钙离子跨细胞转运相关蛋白表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(11): 2505-2513.
[11]	沈向华, 潘登, 范奎奎, 李强, 李婷, 杜晨光. Ghrelin通过弓状核区域α型雌二醇受体神经元介导雌性小鼠采食调控[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(12): 2399-2406.
[12]	白皓，孙研研，陈继兰. 喙畸形研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(3): 417-422.
[13]	蔡旋，王静娴，陈小连，郭奇，朱丽慧，徐建雄. 肠道上皮氧化应激细胞模型的研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(3): 337-346.

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